1.    Objetivo: Describir la metodología para la determinación de Carbamazepina en plasma o suero.

2.    Alcance: Aplicable por el personal profesional y técnico del laboratorio de toxicología analítica del CENATOX en el proceso de determinación de carbamazepina en plasma o suero.

3.    Definiciones: Espectrofotometría:  método basado en la medición de la cantidad de luz absorbida por una sustancia dada en unidades de absorbancia o densidad óptica, la cual es proporcional a la concentración de dicha sustancia.

4.    Responsabilidades:

·         El jefe del laboratorio de toxicología analítica es el responsable de implantar el presente procedimiento.

·         El personal profesional y técnico es responsable de ejecutar lo establecido en este procedimiento.

·         La UGC es la encargada de controlar mediante inspecciones la ejecución correcta de dicho procedimiento.

5.    Condiciones de seguridad: manipular con guantes.

6.    Procedimiento:

       6.1 Fundamento: Se mide la absorbancia de un compuesto incoloro formado entre la Carbamazepina y el cloroformo en el rango UV.

       6.2. Materiales:

6.2.1 Material biológico: plasma o suero.

6.2.2. Reactivos:

·         Hidróxido de sodio al 1N: pesar 40g de hidróxido de sodio y disolverlos en 1 litro de agua destilada.

·         Acetato de etilo P.A.

6.2.3. Equipamiento:

·         Centrifuga.

·         Espectofotómetro.

·         Thermomixer.

6.2.4. Material de laboratorio:

·         Tubos de vidrio con tapas de rosca.

·         Pipetas de vidrio de 5 mL.

·         Puntas plásticas de 1 mL.

·         Gradilla

·         Pipeta automática para 0.2 mL

6.3. Operaciones preliminares:

a)            La muestra se inscribirá en el Registro de muestras y el código que reciba se indicará en la orden de análisis.

b)            La sangre se centrifugará a 2000rpm durante 5 min para obtener el suero o plasma.

6.4. Desarrollo del método

6.4.1. Procedimiento:

1.      Preparar en una gradilla al menos tres tubos debidamente rotulados (blanco, muestra y control) y añadir los reactivos según la siguiente tabla:

     2. Agitar  en Vortex Mixer 1 minuto.

     3. Centrifugar a 3000 rpm 5 minutos

     4. Leer la capa superior de acetato de etilo a 285nm contra blanco reactivo.

         (Ver INS 51B 4400 045)

 6.4.2 Variables a medir: Absorbancia

 6.4.3 Cálculos:

​ C (μg/mL)= Absorbancia de la muestra x Factor.

         Nota: Si se utiliza un equipo programado, se obtiene directamente el valor de la concentración. 

6.4.4 Sensibilidad: 4 μg/mL

6.4.5 Interferencias: presencia de drogas alcalinas que absorban a 285nm.

6.4.6. Causa de error:

-  Poca centrifugación.

-  Mezcla del sobrenadante con sedimento.

-  Cristalería mal fregada.

   6.5 Controles

           6.5.1 Control de calidad: conjuntamente con la muestra se trabaja un patrón de 15 μg/mL. Dicho patrón debe oscilar en el rango de 14 a 16 μg/mL, dado por la fórmula X ± DS.

6.5.2 Valores de Referencia: En humanos los niveles terapéuticos normales están entre 4 y 12 μg/mL.

7.    Requisitos de documentación: Se anotará primeramente en el modelo de solicitud de análisis 01, o en el modelo utilizado por el médico en caso de consulta externa, además se anotará en el modelo recepción de muestra código 03 y registro exámenes laboratorio toxicología código 32 2100.015.

8.    Referencias:

·         Gisbert Calabing Juan Antonio. Medicina legal y Toxicología. 5 edición, Masson S.A., Barcelona.

·         Clarke, D, et al. I Solotion and identification of Drugs. 2 Ediccion, Londres, 1986.

·         Flanagan R S, et al.BasicAnalytical Toxicology. Ginebra. 1995.